Профили седиментации ДНК диплоидных фибробластов. Седиментограммы ДНК эмбриональных фибробластов и фибробластов. Накопление в ДНК клеток человека повреждений первичной структуры

БИОГЕРОНТОЛОГИЯ. СТАРЕНИЕ ЧЕЛОВЕКА

 

Профили седиментации ДНК диплоидных фибробластов. Седиментограммы ДНК эмбриональных фибробластов и фибробластов. Накопление в ДНК клеток человека повреждений первичной структуры

 

 

Теперь я расскажу подробнее о результатах исследований, проведенных нами на культивируемых клетках человека. Повреждения ДНК клеток человека были исследованы при старении этих клеток в организме (in vivo), а также вне организма (in vitro).

 

Кроме того, такие повреждения ДНК были сопоставлены с повреждениями ДНК, возникающими при не очень интенсивном прогревании клеток или облучении их ионизирующим излучением. Рассказывая о наших данных, я познакомлю любознательного читателя с некоторыми особенностями изучения повреждений ДНК «щадящим» методом.

 

Один из основных методов анализа ДНК, использованных нами при исследовании этих вопросов, – метод седиментации ДНК в градиенте щелочной сахарозы. Этот метод уже упоминался (см. с. 27). Мы сразу перейдем к рассмотрению полученных вместе с А. Н. Хохловым данных, делая пояснения методики при изложении результатов.

 

На рис. 8 представлены седиментограммы ДНК эмбриональных фибробластов и фибробластов, полученных из кожи 91‑летнего донора. На графике указано, какой процент ДНК от общей массы ДНК (содержавшейся в клетках, нанесенных на градиент) был в той или иной из фракций (частей), на которые разделяли содержимое центрифужной пробирки после окончания центрифугирования. 1‑я фракция соответствовала дну пробирки, 15‑я – верху градиента.

 

Это означает, что высокомолекулярные фракции ДНК – первые, низкомолекулярные – последние номера фракций. И следовательно, чем больше седиментограмма сдвинута вправо, тем меньше среднее значение молекулярной массы ДНК, тем больше в ней было разрывов.

 

седиментации ДНК диплоидных фибробластов

 

Рис. 8.  Профили седиментации ДНК диплоидных фибробластов медицинского абортуса (1 ) и фибробластов кожи 91‑летней женщины (2 ). Цифры на рисунке – средние значения молекулярных масс ДНК соответствующих клеток

 

На графике приведены также значения средневесовых молекулярных масс, рассчитанных с помощью ДНК фага λb2. Молекулярная масса этой ДНК известна, а положение ее в градиенте, использованном при исследовании клеток человека, позволяло рассчитать массу их ДНК.

 

Очевидно, нелишней будет такая подробность. Штаммы эмбриональных фибробластов были получены из Института медицинской генетики АМН СССР. Предварительно они были исследованы там К. Н. Гринбергом, и хромосомных изменений в них не было найдено, т. е. это были нормальные клетки, хотя получены они были из тканей при аборте.

 

Культуры "взрослых" и "старых" фибробластов получены безболезненным и безвредным методом биопсии с передней поверхности кожи предплечья здоровых доноров, пожелавших, чтобы их клетки были обследованы. (Здесь я опять должен с благодарностью вспомнить о большой помощи со стороны К. Н. Гринберга и Г. Д. Бердышева.) Клетки кожи 91‑летней женщины к нам попали из Института геронтологии АМН СССР (Киев), где эта пациентка находилась на обследовании (и у нее не было найдено резких патологических изменений).

 

Опыты с клетками каждого человека нужно было повторять многократно, поэтому приходилось все культуры пересевать. Исследовались культуры, которые еще не вступили в фазу дегенерации (вспомним, что эмбриональные диплоидные фибробласты человека совершают в культуре клеток около 50 делений, взрослые фибробласты даже меньше).

 

 



 

К содержанию книги: Биология человека. Причины старения организма и долголетие

 

 

Последние добавления:

 

ПАЛЕОПАТОЛОГИЯ. БОЛЕЗНИ ДРЕВНИХ ЛЮДЕЙ

 

 ГЕОЛОГИЯ БЕЛАРУСИ

 

ВАСИЛИЙ ДОКУЧАЕВ

 

ЗЕМЛЕДЕЛИЕ. ПОЧВОВЕДЕНИЕ. АГРОХИМИЯ