|
Для учета энтерококков в
исследуемых объектах используют посев на плотные или жидкие питательные
среды. Прямой посев на элективные питательные среды с последующим подсчетом
выросших .колоний рекомендуется проводить при исследовании продуктов с
относительно высоким содержанием энтерококков. (сырое молоко, творог и
творожные изделия). Результаты на плотных питательных средах учитывают через
24—48 ч инкубации при 37°С.
При небольшом обсеменении продуктов энтерококками {молоко
пoQлe пастеризатора, пастеризованное молоко) рекомендуется проводить посев в
жидкую среду накопления. Этот посев предусматривает два этапа: посев в среду
накопления, подтверждающий тест.
Определение с использованием плотных питательных сред.
Готовят десятикратные разведения исследуемого продукта в соответствии со
стандартным методом.
В качестве питательных сред. используют среду Пейкера.
(Packer) или молочную срёду с полимиксином по Г. П. Калине.
Расплавленные и охлажденные до 45—48°С питательные среды
разливают тонким слоем в чашки Петри. После застывания чашки со средой
используют для посевов или хранят в холодильнике в -течение 7—10 дней. Из
исследуемых разведений в зависимости от цели исследования (при определении
энтерококков как санитарнопоказательных высевают I—IV разведения продукта;
при пищевых отравлениях — IV—VII разведения) берут по 0,1 мл и высевают на
подсушенную поверхность питательной среды Пейкера или Г. П. Калины. Высеянный
материал тщательно втирают шпателем в поверхность сред. Посевы инкубируют в
термостате при температуре 37°С в течение 48 ч.
Типичные колонии энтерококков имеют округлую форму, ровные
края, блестящую поверхность, диаметр 1;5—2 мм и фиолетовую, окраску .да
коричнево-красном фойе среды Пейкера или красную с зоной протеолиза на светло-голубом
фоне среды Г. П. Калины. Подсчитывают все типичные колонии, и число их
пересчитывают на 1 г или 1 мл продукта. 3—5 колояий отсевают на скошенный
агар для дальнейшей идентификации; посевы культивируют при температуре 37°С в
течение 24 ч.
Из колоний, выросших на скошенном агаре, готовят мазки и
окрашивают их по Граму. Одновременно определяют их каталазную активность. Для
этого на очищенное обезжиренное стекло наносят каплю 1,%-ного водного
раствора Н2О2 и в нем растирают петлю культуры. Если пузырьки газа не
выделяются, значит, реакция отрицательная. Грамположительные
каталазоотрицательные диплококки изучают по шести тестам Шермана:
температурные границы роста от 10 до 45°С; рост при 6,5% NaCl; рост при рН
9,6; рост в желчи или 40%-ном желчном бульоне; рост в молоке с 0,1%-ным
метиленовым голубым; терморезистентность (выдерживают при температуре 60°С в
течение 30 мин).
Для ускорения дифференциации культуры можно высеять только
иа бульон, содержащий 40% желчи и имеющий рН 9,6. Одновременно для ридовой
дифференциации .культуры высевают на среды, содержащие теллурит калия, 2, 3,
5-ТТХ, .кровь, молоко, сорбит, маннит и раффинозу. Если штаммы были сняты с
молочно-полимиксинового агара, то для видовой дифференциации их высевают на
те же среды, за исключением сред, содержащих молоко и 2, 3, 5-ТТХ, так как
эти ингредиенты входят в пропись среды выделения. Посевы выдерживают в
термостате при температуре 37°С в течение 24 ч ( 39).
Определение с использосанием жидких питательных сред. Гото
вят десятикратные разведения в соответствии со стандартным методом. В
качестве питательных сред применяют щелочно-полимиксиновую среду (ЩЭС),
желчно-нитратную среду, среду Эндо с кристаллическим фиолетовым и
полимиксином (см. 147).
При небольшом обсеменении молочных продуктов энтерококками
1 мл продукта и соответствующих разведений засевают в пробирки со средой ЩЭС.
Посевы инкубируют при температуре 37°С в течение 24—48 ч. Из каждой засеянной
пробирки петлей пересевают на чашки Петри с подсушенной желчно-цитратной средой
или средой Эндо с кристаллическим фиолетовым и полимикснном. Посевы
выдерживают при температуре 37°С в течение 24 ч.
Типичные колонии энтерококков на желчно-цитратной среде
круглые, с ровными краями, диаметром 1,5—2,0 мм, розово-красного цвета, а на
среде Эндо. с кристаллическим фиолетовым и полимикснном.— ярко-красного. При
наличии типичных колоний энтерококков на чашках Петри определяют титр, в
котором обнаружены энтерококки в исследуемом продукте.
Для ускоренной дифференциации S. faecalis может использоваться
сорбитный агар. К 1 л мясопептонного агара добавляют 10 г сорбита и 600 мг индикатора конго-красного, предварительно растворенных в 5—7 мл
дистиллированной воды (добавляемые компоненты растворяют отдельно при
нагревании,, но не доводя до. кипения), хорошо перемешивают и разливают в
чашки Петри. Среда имеет интенсивно-красную окраску.
Наличие энтерококков в посевном материале учитывается
через 16—18 ч роста при температуре 37°С. Точечные колонии S. faccalis и его
вариантов имеют черную окраску, вырастая на поверхности обесцвеченной вокруг
них среды. S. faecium и S. faecium var. durans, не ферментирующие сорбит,
образуют бесцветные точечные колонии без изменения цвета среды ( 40).
|