|
|
В связи с тем что бифидобактерин
являются анаэробными, при их выращивании в большинство питательных сред
вносят редуцирующие вещества, которые поддерживают низкий
окислительно-восстановительный потенциал в среде. В качестве, редуцирующих
веществ используют аскорбиновую кислоту, сульфит кальция, солянокислый
цистеин, части внутренних органов животных, глюкозу, глюгатион, сульфит
натрия, тиогликолат натрия. Наличие этих веществ в питательных средах
позволяет проводить культивирование бифидобактерий в' пробирках, содержащих
высокий столбик полужидкой питательной среды.
Бифидобактерин чувствительны к рН-среды. Различные
исследователи рекомендуют использовать для культивирования бифидобактерий
питательныесреды с рН в пределах 6,2—7,5. При рН ниже 5,0 рост бифидобактерий
приостанавливается. Трудноразрешимой задачей является выделение
бифидобактерий из образцов, обсемененных посторонними анаэробными
микроорганизмами, а также рядом других микроорганизмов. Сложность заключается
в том, что эта группа микроорганизмов требует наличия в питательной среде
большого набора питательных веществ и чувствительна к различным ингибиторам.
При выделении бифидобактерий из образцов, обсемененных посторонней
микрофлорой, в питательные среды вносят индикаторы (анилииблау, хинаблау), в
результате чего колонии бифидобактерий окрашиваются в различные цвета.
Для селективного выделения бифидобактерий из faeces
разработаны BS-arap I и II (Митсуока) и селективный агар Хенеля, а для
выделения из молочных продуктов используются агар NPNL и модифицированный
агар Рогозы. В эти среды в качестве селективных веществ добавлены канамицин,
неомицин, хлористый литий, азид натрия, сорбиновая кислота, которые
ингибируют главным образом рост бактерий группы кишечной палочки. Разработаны
селективные среды для культивирования определенных штаммов бифидобактерий.
Метод часовых стекол. Готовят ряд десятикратных разведений
исследуемого продукта или faeces. Используют две питательные среды: плотную
среду для выращивания В. prodigiosum и среду Хенеля для выращивания
бифидобактерий.
В чашки Петри заливают расплавленную и охлажденную до
температуры 40—45°С среду Хенеля. После застывания агара чашки Петри помещают
в термостат при 37°С для подсушивания агара. На подсушенную поверхность агара
наносят капли исследуемых разведений, а сверху закрывают часовым стеклом с
культурой В. prodigiosum. Затем эти чашки помешают в гсрмостат при
температуре 37°С на 48 ч. Образовавшиеся колонии бифидобактерий имеют синий
цвет. Подсчитывают количество колоний, выросших на различных разведениях: в I
г нли I мл ( 34). Кроме этого, колонии могут быть пересеяны в полужидкую
питательную среду для выращивания и проведения дальнейших физиологических
исследований и идентификации бифидобактерий.
Посев в пробирки с высоким столбиком питательной среды.
Готовят ряд десятикратных разведений в соответствии с предполагаемым
обсеменением исследуемых продуктов. При приготовлении разведений необходимо
избегать попадания воздуха в пробирки во время перемешивания и переноса в
последующие пробирки.
В качестве питательных сред могут быть -использованы среда
Blaurock, гидролизатно-молочная, кукурузно-лактозная и другие среды (см.
142).
Пробирки с высоким столбиком питательной среды кипятят на
водяной бане в течение 10—15 мин, затем быстро охлаждают и засевают в них
соответствующие разведения. Пробирки после застывания агара помещаю в
термостат при 37°С и выдерживают в течение 48—72 ч. По окончании инкубации
регистрируют разведения, в которых отмечен рост бифидобактерий, подсчитывают
количество -бифидобактерий (в виде гречишных зерен, тяжей или гвоздиков) в
разведении и определяют количество клеток бактерий в 1 мл. Интенсификация
роста бифидобактерий наблюдается в направлении дна пробирки. При массивном
росте микроорганйзмоз, как правило, отмечается наличие стерильной зоны в
верхней части питательной среды, высота стерильной зоны для различных штаммов
различна.
При смешанной микрофлоре кисломолочных поодуктов можно
использовать питательные среды, содержащие нежторые антибиотики, которые
подавляют рост молочнокислых бактерий, но к которым устойчивы бифидобактерии.
|