|
|
Изучение морфологии и строения
клеток, величина которых изется в большинстве случаев микрометрами (1
мкм=0,001 мм), ожно только с помощью микроскопов, обеспечивающих увелиie
исследуемых объектов в сотни (световые микроскопы) и деи тысяч (электронные
микроскопы) раз. В практических лабораях молочных заводов используют
оптические светлопольные оскопы.
ри изучении микробиологических объектов применяют микроы
разных моделей. Наиболее распространены микроскопы маМБИ-1, МБИ-3, МБР-3 и
МБД. Принципиально все микроскопы ены одинаково и состоят из механической
части и оптической мы ( 31).
Гидролизованное молоко — 1000 мл, агар —10— 12 г, глюкоза — 10 г, 1% ный водный раствор 2, 3, 5-трифенилтетразолия хлористого— 10 мл, 1%-ный
водный раствор метиленового голубого — 8 мл, левомицетин — 100 мг
Дистиллированная вода— 1000 мл, натрий углекислый— 5,5 г, двузамещенный фосфат калия — 2,6 г, тиогликолевая кислота—65 мл, хлористый кальций — 0,1 г, желатин—55 г, метиленовын голубой — 0,12 г агяр — 5,0 г
С целью приготовления препаратов для микроскопирования исзуют
чистые и хорошо обезжиренные предметные стекла. Стекйпятят 15 мин в 1%-ном
растворе соды (или в мыльной воде), аскивают водой, погружают в I—2%-ную
соляную кислоту и, нец, тщательно промывают водой. Предметные стекла можно
ботать и другим способом. Вначале их выдерживают в течение в
концентрированной серной кислоте, затем их моют в воде, тят в щелочи и вновь
промывают водой.
Препараты для окрашивания готовят на предметных стеклах.
Техника приготовления препарата заключается в следующем. Из жидких культур
каплю материала наносят на предметное стекло и размазывают петлей. Из
культуры, выращенной на. плотной среде, петлей берут мельчайшую частичку,
разхмешивают в заранее нанесенной на предметное -стекло капле водопроводной
воды или физиологического раствора и размазывают по стеклу. Мазку дают
высохнуть на воздухе, затем его фиксируют. Для этого, держа стекло мазком
вверх, его трижды проводят через пламя газовой или спиртовой горелки. Во
избежание перегрева препарата продолжительность фиксации не должна превышать
5—6 с, а время прямого воздействия пламени — 2 с. В этом случае мазок будет
хорошо держаться на стекле. Для фиксации можно также использовать этиловый
спирт 96%-ный, метиловый спирт, ацетон, смесь по Никифорову (смесь равных
объемов абсолютного спирта и эфира), 10%-ный растй-ор азотнокислого серебра и
др.
Методы окраски микробов разнообразны. Их можно разделить на
две группы: ориентировочная простая окраска и окраска диффециальиая,
выявляющая химические и структурные особенности йроорганизмов.
Ориентировочная окраска. Для ориентировочной окски
препаратов используют разведенный карболовый фуксин Ци(1 : 10),
продолжительность окрашивания 10—30 с; раствор ффлера, продолжительность
окрашивания 3—10 мнн; спирто-водй раствор метиленового голубого,
продолжительность окрашнва1я 3—5 мнн; водный раствор метиленового голубого,
продолжияьность окрашивания 5—10 мин.
Для окрашивания препаратов из молока предпочтительнее
льзоваться растворами, содержащими метиленовый голубой, так в этом случае
можно получить отчетливо различимые микроорнизмы синего цвета, а фон (молоко)
окрашивается в блсдно-гобой цвет.
Дифференциальная окраска. Наиболее употребимой
фференциальной окраской является окраска по Граму. При этом особе выявляется
способность бактерий удерживать краситель и обесцвечиваться в спирте, что
связано с химической структурой икробной клетки.
На фиксированный мазок накладывают кусочек фильтровальной
'маги и иа нее наливают карболовый раствор таким образом, чтобы ючилась
фильтровальная бумага, и выдерживают 0,5—1 мин. Кратель сливают и, не смывая,
наливают 3—4 капли раствора Люголя, держивают 1 мин. После этого раствор
Люголя сливают и пропоаскивают препарат в 96%-иом спирте в течение 05—1 мин
до тех ор, пока не смоется весь краситель. Затем мазок промывают водой
окрашивают разведенным фуксином. Для этого капают 3—4 капи и выдерживают
0,5—1 мин. Сливают фуксин, промывают мавс?£ одой и просушивают препарат
фильтровальной бумагой.
Окраска по Граму в модификации А. И. С ие в а. Заготовляют
полоски фильтровальной бумаги, пропитанной 'о-ным спиртовым раствором
кристалле полета и высушенной. На епарат накладывают такую полоску (меньше
предметного стекла) наливают 2—3 капли воды. Окрашивание длится 2 мин, после
чего имают фильтровальную бумагу пинцетом и наливают 3—4 капраствора Люголя,
выдерживая препарат 1 мин. Затем его обесечивают спиртом и окрашивают
разведенным фуксином з течение —1 мин. Фуксин сливают, мазок промывают водой
н просушиваТ препарат фильтровальной бумагой.
Окраска по Граму в модификации Г. П. К ан ы. Иа чистое и
охлажденное после фламбироваиия предметное екло наносят петлейкаплю
дистиллированной воды, в которую осят также петлей небольшое количество
агаровой культуры, не змешивая в воде. При приготовлении препарата из жидкой
кульры на стекло наносят каплю, затем вносят также петлей каплю актива 1.
Смесь распределяют на участке площадью примерно см2, подсушивают при
комнатной температуре и фиксируют, меденно проводя один раз через пламя
горелки. На одном стекле ожно готовить по 8—10 мазков, отделяя их один от
другого ниями, проведенными с лицевой стороны стекла.
|