|
Стерилизация (от лат. serilis —
бесплодный) — обеспложивание,. освобождение от всего живого. В
микробиологической практике стерилизации подвергают посуду, питательные среды
и другие материалы, применяемые в работе. Стерильность может быть достигнута
при помощи физических и химических методов.
Физические методы. При стерилизации физическими методами
применяют высокую температуру, ультрафиолетовое облучение или бактериальные
фильтры ( 149).
Прокаливание на огне — наиболее простой, но достаточно
надежный вид стерилизации. Его применяют для поверхностной стерилизации
негорючих и теплоустойчивых предметов непосредственно перед их
использованием-. Для стерилизации обрабатываемый предмет несколько раз
проводят через пламя горелкн. Таким образом стерилизуют шпатели, пипетки,
платиновые или никелиновые петли и иглы, предметные и покровные стедла и т.
д.
Кипячение — тоже несложный вид стерилизации. При этом
способе не погибают споры, происходит уничтожение только вегетативноймикрофлоры.
Этот вид стер'илизации можно использовать для обработки инвентаря и посуды,
используемых для определения редуктазных проб. Добавление 1—2% соды
значительно повышает стерилизующее действие кипящей воды.
Фламбировапие также используется для обработки
поверхностей посуды непосредственно перед исследованием. Для этого в посуду
наливают небольшое количество спирта, пинцетом берут небольшой кусочек ваты,
смоченной спиртом, и обрабатывают поверхность посуды, затем спирт зажигают.
После того как пламя погаснет, поверхность посуды остынет, она используется
для исследования.
Суховозд ушная стерилизация производится в сушильных
шкафах. Таким образом стерилизуют лишь сухие предметы. Закладку материалов
производят так, чтобы стерилизуемые предметы не касались горячих стенок и
нагретый воздух свободно проникал между ними.
После включения сушильного шкафа температура должна
повышаться в течение 10—12 мин, после чего следят за термометром и, регулируя
обогрев, поддерживают нужную температуру в течение необходимого времени. По
окончании стерилизации сушильный шкаф выключают, дают остыть до 50°С, после
чего отворяют дверки шкафа и вынимают стерилизуемые предметы. Бумага и пробки
из ваты не должны быть обуглены или иметь запах дыма. Они могут лишь слегкв
пожелтеть под влиянием высокой температуры — пожелтение наблюдается при
температуре по ниже 160°С. При температуре выше 175°С бумага и вата сгорают.
Стерилизации в сушильном шкафу продолжается 45 мин — I ч при 160—170°С.
При суховоздушной стерилизации для контроля режимов
стерилизации можно применить сахарозу или сахарный песок, которые плавятся
при 170°С.
Текучим паром стерилизуют при температуре 100°С. Для этой
цели существует специальный прибор — аппарат Коха. Можно стерилизовать
текучим паром и в автоклаве с открытым краном. До начала стерилизации в
аппарат наливают воду до уровня решетки. Затем заполняют аппарат, располагая
предметы неплотно, чтобы пар свободно обтекал их.
Подогрев воды до появления пара происходит в течение 10—
15 мин. Отсчет времени стерилизации ведут с момента выхода из крана полной
струи пара. По истечении времени стерилизации (30— 60 мин) выключают обогрев,
открывают крышку, дают прибору слегка охладиться и вынимают стерилизованные
предметы еще горячими во избежание излишнего увлажнения. После окончания
работы аппарат освобождают от воды. Он должен быть оставлен в сухом виде.
Текучим паром стерилизуют такие материалы, которые
портятся или разлагаются при стерилизации под давлением: некоторые
питательные среды, растворы углеводов. Стерилизацию проводят в течение 30 мни
с момента появления пара и повторяют в течение трех дней (дробная
стерилизация). При этом методе стерилизации уничтожаются только вегетативные
формы бактерий; споры не погибают, но они прорастают в течение 1—2 сут, и
образовавшиеся вегетативные формы гибнут в процессе стерилизации на второй к
третий день.
Стерилизация паром под давлением — наиболее
надежный и широко используемый способ стерилизации. Этот вид стерилизации
осуществляют в автоклаве. Обычно в автоклаве стерилизуют под давлением 0,1
МПа, что соответствует 120—12 ГС. Таким образом, в течение 15—20 мин
стерилизуют растворы для приготовления разведений, питательные среды, ие
содержащие на
тивного белка и углеводов; При 0,05 ДШа, что сбоуветствует
112— 115°G, стерилизуют в. течение 15 мин некоторые питательные среды,
содержащие углеводы, и растворы углеводов. Ниже приведены соотношения между
показаниями манометра и температурой внутри автоклава. Для контроля
правильной работы стерилизационных аппаратов -среди стерилизуемых предметов
можно закладывать специальные тесты — запаянные ампулы, содержащие химические
вещества, которые плавится при соответствующей температуре, или максимальный
термометр.
Для контроля режимов стерилизации в автоклаве, в ампулы
помещают небольшое количество бензонафтола (плавится при 110°С), антипирина(при
113°С) резерцина (при Н9°С), серы (при Ц9°С), бензойной кислоты (при 120°С),
к которым подмешано несколько крупинок красителя (фуксина, метиленового
голубого и т. д.).
Температура и длительность автоклавирования питательных
сред определяются прежде всего составом сред. Субстраты, содержащие вещества,
не выдерживающие нагревания до 120°С, стерилизуют при' 116—115°С. Молоко,
дрожжевой автолизат, среды с желатином стерилизуют при 112—115°С в течение 15
мин. Среды, содержащие сахара и витамины, стерилизуют при 112—115°С с
выдержкой 20—30 мин,' но лучше с использованием бактериальных фильтров.
Остальные питательные среды стерилизуют при 120°С в течение 20—30 мин. -
Выбирая режим стерилизации, учитывают рН среды. В случае
кислой реакции среды при стерилизации могут подвергнуться гидролизу входящие
в ее состав полимеры. При рН ниже 5,0 частично гидролизуется и теряет
способность образовывать гель агар-агар. Если среда щелочная, то при
стерилизации выпадают в осадок соли железа, карамелизуются и становятся
недоступными для микроорганизмов сахара. Чтобы избежать этих явлений, среды
стерилизуют при нейтральных значениях рН, а после стерилизации подкисляют или
подщелачивают. Кроме того, растворы ряда компонентов можно стерилизовать
.отдельно при таком режиме, при котором они не изменяются, а затем стерильно
добавлять в среды в необходимом количестве.
|