|
|
Образцы для проведения селекции
готовят следующим образом: получают десятикратное разведение исследуемого
образца в физиологическом растворе или растворе фосфатного буфера ().
Перед посевом пробирки с высоким столбиком плотной среды
Blaurock или кукурузно-лактозной среды расплавляют на водяной бане, затем
быстро охлаждают до 45°С. В подготовленные пробирки с расплавленной средой
засевают по 1 мл разведений (10~8 и 10~9). Содержимое- пипетки не выдувают до
конца, чтобы воздух не попал в среду. Пробирки с посевами помещают в
термостат с температурой 37 ± ГС и выдерживают так 48—72 ч.
С помощью петли или пастеровской пипетки выделяют
изолированные колонии и переносят их в отдельные пробирки с полужидкой питательной
средой (печеночно-цистиновой, кукурузно-лактозной или другой), разлитой в
пробирки высоким столбиком (10 м,). Перед посевом среду расплавляют на
водяной бане в течение 5—10 мин, быстро охлаждают до 40—-45°С и производят
посев. Колонию тщательно растирают стерильной пипеткой, перемешивают и посевы
выдерживают при 37±1°С в течение 24—48 ч до образования интенсивного
помутнения среды. Для чистой культуры бифидобактерйй обязательно наличие
поверхностной стерильной зоны от 0,5 до 1 см. Выросшую культуру пассеруют 2—3 раза на полужидкой питательной среде, внося 5—10% инокулята. Посевы выдерживают
при 37± 1°С в течение 16—36 ч. Культуру (5%), выросшую на полужидкой
питательной среде, засевают в стерильное обезжиренное молоко и в стерильное
обезжиренное молоко с 0,5% кукурузного экстракта. Посевы термостатируют при
37±1°Сдо образования сгустка. Для дальнейшей работы оставляют штаммы, которые
свернули стерильное обезжиренное молоко в течение 24—48 ч, а стерильное
обезжиренное молоко с кукурузным экстрактом—за 12—18~ч. Каждый из выделенных
штаммов проверяют, просматривая микроскопический препарат.
Бифидобактерии — палочки, чрезвычайно вариабельные
по внешнему виду: на питательных средах для них характерны слегка изогнутые и
разветвленные формы с бифуркациями, булововидньши и гантелевндными
утолщениями на концах. Клетки располагаются хаотично, отдельно или в
скоплениях.
На молоке ветвления клеток не наблюдается, бифидобактерии
приобретают форму тонкой зернистой палочки с утолщениями на концах. Штаммы,
не имеющие типичных культуральных и .морфологических свойств, не
рекомендуется использовать в производстве кисломолочных продуктов.
Выделенные штаммы проверяют на принадлежность их к бифи-
добактериям на основании их биохимической активности и некоторых других
биологических свойств, таких, как образование газа из углеводов, отношение к
желатину, образование каталазы, восстановление нитратЪв в нитриты,
ферментативной активности. Штампы, которые могут быть отнесены к бифидобактерия.м,
должны быть ка- талазонегативнымн, не разжижать желатин, не образовывать газа
при сбраживании углеводов (за исключением вида В. adolescenis, умеренно
продуцирующего углекислый газ из глюканата и нентоз), не восстанавливать
нитраты в нитриты. Бифидобактерии должны характеризоваться
антибиотнкоустойчнвостыо, антибиотической активностью по отношению к
условно-патогенной и патогенной микрофлоре Е. coli, Sh. sonnei, Pr. vulgaris,
S. aureus и др. Выделенные штаммы повторно исследуют на активность свертывания
и по органо- лептическим свойствам.
Для использования в производстве рекомендуются штаммы
бифи- добактерий, относящиеся к видам В. bifidum, В. longum и В. adolescenis,
как наиболее часто встречающиеся у людей и обладающие способностью сквашивать
стерильное обезжиренное молоко не более чем за 48 ч, а стерильное
обезжиренное молоко с кукурузным экстрактом— за 12—18 ч.
По органолептическим показахелям отбирают штаммы,
образующие при сквашивании молока специфический вкус и аромат, обусловленный
продуцированием молочной и уксусной кислот. Штаммы, образующие в молоке
горечь или другие посторонние привкусы, отбраковывают. Чистоту штаммов
проверяют микроскопнрованием окрашенного препарата (10 полей зрения).
Если возникает сомнение в микробиологической чистоте
штамма, делают посев штаммов на питательный агар с 9% NaCl, среду Эндо,
5%-ный кровяной агар, разлитый в чашки Петри, и на жидкую среду Сабуро.
|