 |
|
|
БИОЛОГИЯ ПОЧВ |
ИССЛЕДОВАНИЕ ОТДЕЛЬНЫХ ГРУПП ПОЧВЕННЫХ ОРГАНИЗМОВ
|
Смотрите также:
Мейен - Из истории растительных династий
Биографии биологов, почвоведов
|
Почвенные грибы
Методы выделения почвенных грибов
Для выделения грибов из почвы используют специальные среды. Наиболее употребительные из них сусло-агар и некоторые синтетические среды, в состав которых входят глюкоза, сахароза или фруктоза. В среды можно добавлять селективные источники углерода — целлюлозу, хитин, кератин, лигнин, доступные определенным группам грибов. В среды добавляют специфические химические вещества (ингибиторы), не препятствующие росту грибов и подавляющие рост других групп микроорганизмов, а также нетоксические вещества, не используемые в метаболизме грибов, но изменяющие условия среды (кислотность, щелочность, осмотическое давление и т. д.). В качестве ингибиторов, угнетающих рост бактерий, используют следующие вещества: органические кислоты, красители, из которых наибольшее распространение получили бенгальский розовый, кристаллический фиолетовый, малахитовый зеленый. Применяют также комбинации из красителей и антибиотиков. Так, бенгальский розовый добавляют вместе со стрептомицином (50—70 мг/л). Для селективного выделения грибов из почвы применяют следующие антибиотики: хлормицетин (5 мг/л), неомицин (50—100 мг/л), полимиксин (50 мг/л), пенициллин (50 мг/л), эндомицин (5—10 мг/л).
Выделение грибов методом посева из почвенной суспензии на плотные среды дает возможность выявить в большей или меньшей степени набор видов микромицетов, содержащихся в той или иной почве. Однако этот метод не дает представления о том, в каком состоянии находятся те или иные виды грибов в почве: в состоянии спор или активно растущего вегетативного мицелия.
Для разделения спор и мицелия используют следующие методы.
1. Метод капиллярных педоскопов Перфильева и Габе, позволяющий наблюдать растущий мицелий и спороношения в естественной среде обитания. 2. Флотационный метод, при котором навеску почвы помещают в двухфазную систему (воду и масло), где споры грибов в результате большей гидрофобности всплывают на поверхность. 3. Высушивание грибов над хлорной известью. Предварительно определяют скорость гибели от высушивания спор и вегетативного мицелия. Мицелий погибает значительно быстрее, чем споры. 4. Смыв спор сильной струей воды. Споры хуже адсорбируются почвенными частицами, чем нити мицелия, и смываются значительно быстрее.
Определение количества и биомассы грибов в почве
Использование метода разведений почвенной суспензии с высевом на различные питательные среды не дает реального представления об истинной заселенности исследуемой почвы грибами.
Для прямого учета грибов в почве применяют метод Хансена — определения длины мицелия и числа спор с помощью мембранных фильтров. Метод, усовершенствованный Т. Г. Мирчинк и Т. С. Демки- ной, состоит в следующем. Навеску почвы (0,5—2 г) или три параллельные навески по 1 г растирают в ступке резиновым пестиком с небольшим количеством воды в течение 5 мин. Переносят в колбу с 500 мл дистиллированной воды и встряхивают в течение 5 мин. Почвенную взвесь переносят в цилиндр на 500 мл, отбирают пробу в 10 мл, не давая отстояться, всегда с одного и того же уровня и фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 2,5 мкм.
После высушивания на воздухе мембранный фильтр окрашивают смесью 1%-ного водного раствора дианилового голубого и 5%-ного водного раствора фенола в отношении 1 : 5, подсушивают на воздухе и рассматривают под микроскопом, предварительно осветляя фильтр в капле иммерсионного масла. Для каждого почвенного образца используют два мембранных фильтра, просматривая в каждом по 50 полей зрения. Измеряют длину грибных гиф с помощью окуляра-микрометра. Используют объектив увеличения 40Х. Длину мицелия рассчитывают по формуле
Для установления таксономического положения грибов определяют их культуральные и морфологические признаки, строение репродуктивных органов.
Методы исследования почвенных грибов
Культуральные признаки грибов описывают на плотных питательных средах в чашках Петри. Используют сусло-агар и синтетические среды. За культурой наблюдают в течение нескольких дней или даже двух недель с интервалом 3—4 дня. При описании культуральных признаков грибов отмечают скорость роста колоний (быстро растущие или медленно растущие), внешний вид колонии, текстуру колонии (бархатистая, пушистая, шерстистая, шероховатая, войлочная), окраску колонии, окраску субстратного и воздушного мицелия, диффузию пигмента в агар, окраску окружающей среды. Отмечают складчатость колонии, наличие эксудата, его цвет, запах культуры.
Для характеристики морфологических признаков культуры грибов сначала просматривают на чашках при малом увеличении микроскопа, а затем готовят микроскопический препарат. Для наблюдения за репродуктивными органами из колонии вырезают блоки с помощью пробочного сверла. После их изъятия на чашках остаются лунки.
Через 1—2 дня лунка зарастает мицелием, который можно наблюдать под микроскопом. За развитием мицелия и спорогенезом можно наблюдать на агари- зованных стеклах. Стерильной расплавленной средой покрывают предметные стекла, которые помещают в чашку Петри на П-образную стеклянную подставку. Посев гриба производят штрихом по длинной стороне стекла. Штрихи покрывают стерильными покровными стеклами так, чтобы под ними не оставалось пузырьков воздуха и чтобы часть штриха была свободной. Во избежание пересыхания агара в чашку наливают на дно стерильную воду. Через 6—8 дней инкубации при 25° стекла вынимают и, очистив нижнюю сторону от агара, микро- скопируют.
Мицелий со спороношениями удобно рассматривать, приготовив препарат следующим образом. Небольшой кусочек питательной среды помещают на стерильное предметное стекло, инфицируют грибной культурой, покрывают покровным стеклом и инкубируют 2—3 сут. Затем снимают покровное стекло, кладут его на предметное и микро- скопируют.
Для изготовления микроскопического препарата препаровальными иглами вырезают небольшой участок колонии, помещают в каплю воды и закрывают покровным стеклом. К воде добавляют этиловый спирт 1 : 1 или концентрированную уксусную кислоту, поскольку споры грибов не смачиваются водой. Для приготовления микроскопических препаратов грибов используют специальную жидкость: карболовая кислота кристаллическая — 20 г, глицерин — .40 мл, дистиллированная вода — 20 мл.
Для прижизненной окраски грибов используют как основные (ген- циановый фиолетовый, метиленовый синий, сафранин, нейтральный красный, метиловый фиолетовый), так и кислые (эритрозин) краски в концентрации 1 : 500, 1 : 1000, 1 : 10000.
|
|
|
|
К содержанию книги: И. П. БАБЬЕВА, Г. М. ЗЕНОВА, Д.Г.ЗВЯГИНЦЕВ
|
Последние добавления:
Вильямс. Травопольная система земледелия
Качинский - Жизнь и свойства почвы
Вернадский - химическое строение биосферы